在高效液相色譜(HPLC)分析領(lǐng)域，色譜柱作為核心分離部件，其性能穩(wěn)定性直接決定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。Kromasil 色譜柱憑借高柱效、良好的化學(xué)穩(wěn)定性及寬 pH 適用范圍，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、環(huán)境等領(lǐng)域。然而，若保存方法不當(dāng)，易導(dǎo)致固定相塌陷、柱內(nèi)殘留污染物堆積、柱效下降等問(wèn)題，大幅縮短使用壽命。本文將系統(tǒng)梳理 Kromasil 色譜柱的正確保存方法，涵蓋保存前預(yù)處理、不同使用狀態(tài)下的保存策略、長(zhǎng)期儲(chǔ)存維護(hù)要點(diǎn)及常見(jiàn)誤區(qū)，為實(shí)驗(yàn)室人員提供標(biāo)準(zhǔn)化操作指引。
 

　　一、保存前的關(guān)鍵預(yù)處理：清除殘留與平衡柱床
 

　　無(wú)論短期暫停使用還是長(zhǎng)期儲(chǔ)存，保存前的柱體清潔與平衡是基礎(chǔ)步驟，其核心目標(biāo)是清除柱內(nèi)殘留的樣品組分、流動(dòng)相添加劑(如鹽類(lèi)、緩沖劑)及有機(jī)改性劑，避免固定相被腐蝕或堵塞。具體操作需遵循以下流程：
 

　　首先，針對(duì)不同流動(dòng)相體系選擇適配的沖洗溶劑。若使用過(guò)含緩沖鹽的流動(dòng)相(如磷酸鹽、醋酸鹽緩沖液)，需先用5%-10% 的甲醇 / 水溶液或乙腈 / 水溶液(不含鹽)以 1.0-2.0mL/min 的流速?zèng)_洗 30-60 分鐘，確保移除柱內(nèi)鹽類(lèi) —— 鹽類(lèi)殘留會(huì)在柱內(nèi)結(jié)晶，導(dǎo)致柱壓升高、峰形拖尾，嚴(yán)重時(shí)會(huì)損壞固定相顆粒。若分析過(guò)含強(qiáng)極性或難洗脫組分(如蛋白質(zhì)、色素)的樣品，需先用100% 的甲醇或乙腈沖洗 20-30 分鐘，再切換至保存溶劑，避免殘留組分在柱內(nèi)吸附凝固。
 

　　其次，完成沖洗后需進(jìn)行柱床平衡。根據(jù)后續(xù)保存條件，將色譜柱切換至對(duì)應(yīng)的保存溶劑并維持 10-15 分鐘，確保柱內(nèi)充滿保存溶劑且柱床處于穩(wěn)定狀態(tài)。平衡過(guò)程中需密切監(jiān)測(cè)柱壓變化，若柱壓波動(dòng)超過(guò) 5%，需排查是否存在管路泄漏或溶劑互溶問(wèn)題，避免因壓力驟變導(dǎo)致固定相塌陷。

 

 

　　二、分場(chǎng)景保存策略：短期暫停與長(zhǎng)期儲(chǔ)存的差異化操作
 

　　Kromasil 色譜柱的保存方法需根據(jù)停用時(shí)間長(zhǎng)短調(diào)整，核心原則是避免固定相干燥、防止化學(xué)腐蝕、維持柱床穩(wěn)定性，具體可分為短期暫停(1-7 天)與長(zhǎng)期儲(chǔ)存(超過(guò) 7 天)兩種場(chǎng)景。
 

　　(一)短期暫停使用的保存方法
 

　　若色譜柱僅暫停使用 1-7 天，且后續(xù)仍需在相同流動(dòng)相體系下使用，可采用 “原位保存” 策略，操作步驟如下：
 

　　用當(dāng)前流動(dòng)相(不含鹽)以 0.5-1.0mL/min 的流速?zèng)_洗 10-15 分鐘，清除柱內(nèi)殘留樣品；
 

　　保持色譜柱與管路連接，關(guān)閉輸液泵，將柱兩端的堵頭略微松開(kāi)(留出微小縫隙)，避免柱內(nèi)溶劑因溫度變化產(chǎn)生壓力波動(dòng)；
 

　　若實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度波動(dòng)較大(如晝夜溫差超過(guò) 5℃)，需將色譜柱轉(zhuǎn)移至恒溫柜(溫度控制在 20-25℃)，防止溶劑揮發(fā)或冷凝導(dǎo)致固定相干燥。
 

　　需特別注意：若短期暫停期間流動(dòng)相含易揮發(fā)組分(如四氫呋喃)，需每天檢查一次柱內(nèi)溶劑液位，若發(fā)現(xiàn)液位下降超過(guò) 1cm，需補(bǔ)充新鮮流動(dòng)相，避免固定相暴露在空氣中。
 

　　(二)長(zhǎng)期儲(chǔ)存的保存方法
 

　　若色譜柱需長(zhǎng)期儲(chǔ)存(超過(guò) 7 天)，或后續(xù)可能更換流動(dòng)相體系，需采用 “離線密封保存” 策略，核心是選擇適配的保存溶劑并確保柱體密封，具體步驟如下：
 

　　沖洗柱體：若之前使用過(guò)含緩沖鹽的流動(dòng)相，先用 5%-10% 甲醇 / 水溶液沖洗 60 分鐘，再用 100% 甲醇沖洗 30 分鐘；若使用過(guò)酸性或堿性流動(dòng)相(pH<2 或 pH>8)，需先用中性甲醇 / 水溶液(pH=7 左右)沖洗 40 分鐘，再切換至 100% 甲醇或乙腈；
 

　　選擇合適的保存溶劑：Kromasil 硅膠基質(zhì)色譜柱(如 C18、C8 柱)推薦使用100% 甲醇或乙腈作為保存溶劑，這類(lèi)溶劑極性適中，既能防止固定相干燥，又能抑制微生物滋生；若為特殊固定相(如氨基柱、氰基柱)，需使用50% 甲醇 / 水溶液，避免固定相水解；
 

　　密封柱體：沖洗完成后，立即斷開(kāi)色譜柱與管路的連接，用無(wú)塵紙巾擦拭柱兩端的接口，迅速套上專(zhuān)用的 PTFE 堵頭(確保無(wú)殘留溶劑泄漏)，并在柱體標(biāo)簽上標(biāo)注保存日期、保存溶劑及前次使用的流動(dòng)相體系；
 

　　儲(chǔ)存環(huán)境控制：將密封后的色譜柱直立放置在陰涼干燥處，避免陽(yáng)光直射(紫外線會(huì)加速固定相老化)，環(huán)境溫度控制在 10-30℃，相對(duì)濕度不超過(guò) 60%，同時(shí)遠(yuǎn)離有機(jī)溶劑揮發(fā)源(如甲醇、乙腈試劑瓶)，防止柱體材質(zhì)被腐蝕。
 

　　三、保存后的維護(hù)與復(fù)用檢查：確保柱效恢復(fù)
 

　　色譜柱從保存狀態(tài)恢復(fù)使用前，需進(jìn)行系統(tǒng)性檢查與活化，避免因保存過(guò)程中的潛在問(wèn)題影響分析結(jié)果。具體操作包括以下三個(gè)關(guān)鍵步驟：
 

　　首先，外觀與密封性檢查。取出色譜柱后，觀察柱體是否有破損、漏液痕跡，檢查兩端堵頭是否松動(dòng) —— 若堵頭松動(dòng)，需立即補(bǔ)充保存溶劑并重新密封，防止固定相干燥。若發(fā)現(xiàn)柱內(nèi)溶劑出現(xiàn)渾濁或變色，需重新用新鮮保存溶劑沖洗，排除微生物污染或固定相降解的可能。
 

　　其次，柱效與壓力測(cè)試。將色譜柱重新連接至 HPLC 系統(tǒng)，用保存溶劑以 0.5mL/min 的流速緩慢啟動(dòng)泵，逐步升高流速至 1.0mL/min，觀察柱壓是否穩(wěn)定(波動(dòng)范圍應(yīng) < 3%)。隨后注入標(biāo)準(zhǔn)樣品(如萘、苯甲酸鈉)，記錄理論塔板數(shù)、對(duì)稱(chēng)因子及保留時(shí)間 —— 若理論塔板數(shù)較保存前下降超過(guò) 10%，或?qū)ΨQ(chēng)因子偏離 0.9-1.1 的范圍，需用梯度洗脫法(如甲醇 / 水從 5% 升至 100%)沖洗柱體，恢復(fù)柱效。
 

　　最后，流動(dòng)相兼容性過(guò)渡。若復(fù)用后的流動(dòng)相體系與保存溶劑差異較大(如從甲醇切換至含緩沖鹽的水溶液)，需用 5%-10% 的甲醇 / 水溶液(不含鹽)作為過(guò)渡溶劑，以 1.0mL/min 的流速?zèng)_洗 30 分鐘，避免溶劑互溶產(chǎn)生氣泡或柱壓驟升。
 

　　四、常見(jiàn)保存誤區(qū)與規(guī)避建議
 

　　在 Kromasil 色譜柱的實(shí)際保存過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室人員常因操作不當(dāng)導(dǎo)致柱效下降，需重點(diǎn)規(guī)避以下四類(lèi)誤區(qū)：
 

　　誤區(qū)一：直接用含鹽流動(dòng)相保存—— 緩沖鹽在柱內(nèi)易結(jié)晶，堵塞固定相孔隙，導(dǎo)致柱壓升高。規(guī)避建議：保存前必須用無(wú)鹽溶劑沖洗，確保柱內(nèi)無(wú)鹽殘留；
 

　　誤區(qū)二：柱體橫放儲(chǔ)存—— 橫放會(huì)導(dǎo)致柱床受力不均，長(zhǎng)期可能引發(fā)固定相塌陷，影響柱效。規(guī)避建議：無(wú)論短期還是長(zhǎng)期保存，均需將色譜柱直立放置，柱兩端保持水平；
 

　　誤區(qū)三：使用純水作為保存溶劑—— 純水易滋生微生物，且會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)固定相水解，縮短柱壽命。規(guī)避建議：僅在特殊固定相(如親水作用色譜柱)的短期保存中使用純水，且需添加 0.05% 的疊氮鈉抑制微生物；
 

　　誤區(qū)四：保存后直接接入新流動(dòng)相—— 不同溶劑的互溶度差異可能產(chǎn)生氣泡，或?qū)е鹿潭ㄏ嗤蝗皇湛s / 膨脹。規(guī)避建議：恢復(fù)使用前需用過(guò)渡溶劑梯度沖洗，確保柱內(nèi)溶劑與新流動(dòng)相充分兼容。